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第15回実験センターセミナー  要旨


 KOD DNA polymerase は、エキソヌクレアーゼ活性があり、fedelityが高く、他のfedelityの高い酵素(Pfu, Vent など)の伸長速度 の遅いという欠点が無く、Taq polymeraseよりも伸長速度が速い。2kbpぐらいまでのcDNAの増幅に向いている。
 KOD Dashは、エキソヌクレアーゼ活性を削った改変型KOD DNA polymerase とKOD DNA polymerase を混合することで、10kbpの cDNAも増幅させることができる。しかも、伸長速度が速いので短時間でPCR終了できる。また、耐熱性が強いので、denature温度を 98度まで上げられ、GC rich な template でもPCRができる。


discussionで出た話
   PCR product のcloning は、T vector の方が、blunt で入れるより有効である。blunt 方では、バンドとしては確認されない、 本来のPCR product より小さな断片が、cloning されることがあるが、T vector の方は、完全に伸長された断片だけに、ヌクレオチ ドが付加されるので、完全に伸長された断片が、cloning される。PCR product のligation は、効率が悪いので、ligation 反応は長め に行った方がよい。

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Last Updated 2005/7/27