丸尾　良浩（小児科学講座）

実際の遺伝子解析を例にして、DNAシーケンサーを活用した遺伝子解析の手法を解説する。

１．PCRからシーケンスまで

1）PCR法による遺伝子の増幅：PCRプライマーの設計のための塩基配列入手法
2）電気泳動
3）PCR産物の回収：クロロフォルム・エタノール沈殿
4）シーケンス法：シーケンス法の原理、32Pを用いたダイレクトシーケンス法、Big Dye terminaterを用いたシーケンス法

２．実際の解析例

ビリルビンUDP-グルクロン酸転移酵素（UGT1A1）の解析を基に、PCRからダイレクトシーケンスの流れを説明する

３．シーケンス上の注意点

1）シーケンスのコストを下げるためには
2）シーケンスプライマーの設計上の注意
3）シーケンサーにより得られたデータを読む上での気をつけるべき配列
4）シーケンス反応後の処理法の違い

４．シーケンス後に考えるべきこと

1）変異、それとも多型？
2）その変異に病原性はあるのか？
3）発現実験へ